糖化血红蛋白临床检测方法进展研究

・　９５４　・　国际检验医学杂志２０１２年４月第３３卷第８期Ｉｎｔ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，Ａｐｒｉｌ　２０１２，Ｖｏ１．３３，Ｎｏ．８　・综　述・　糖化血红蛋白临床检测方法进展研究　李　黎综述，刘铁牛审校　（１．中国人民解放军第一五八医院检验科，广西柳州５４５００６；２．中国人民解放军　第三。三医院检验科，南宁５３００２１）　关键词：糖尿病；糖化血红蛋白；检测方法；综述　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３０．２０１２．０８．０２９　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７３—４１３０（２０１２）０８—０９５４—０３　近些年来，随着物质生活水平的逐步提高，糖尿病（ＤＭ）　的发病率呈不断上升的趋势。有研究显示，中国的ＤＭ发病　率已高达９．７　ｌｌｊ。目前临床上对ＤＭ诊疗和监测多采用空　腹、餐后血糖或是口服葡萄糖耐量试验等，但其只能反映瞬间　血糖水平的检验指标，容易受到各种因素影响而失去检测意　义。糖化血红蛋白（ＧＨｂ）是国际上公认的町以反映长期血糖　水平的金标准。２ｏｌＯ年，美国糖尿病协会（ＡＤＡ）在《２０１０年　糖尿病诊疗指南》中正式推荐以ＨｂＡｌｃ作为诊断ＤＭ的优先　方法　］。在国内，也有不少学者提出类似主张，但对其测定方　法意见不一［３　］。目前临床实验中检测ＧＨｂ的方法有３Ｏ余　种，各有优劣，根据反应原理可以分为两个大类：一类基于　ＧＨｂ和非ＧＨｂ所带电荷及等电点不同加以分离检测，如离子　交换层析法、电泳法等；一类基于ＧＨｂ分子结构特点，如亲和　层析法、免疫法和酶法等［　。现就ＧＨｂ的临床检测方法做一　综述。　１　ＧＨｂ的生化特性　广义的ＧＨｂ是指结合了任何形式碳水化合物的血红蛋　白（Ｈｂ）。典型的成人血红蛋白（Ｈｂ）是由ＨｂＡ（占Ｈｂ总量的　９７　）、ＨｂＡ２（２．５　）和ＨｂＦ（０．５　）组成ｌ７］。ＨｂＡ中未结合　糖类的为ＨｂＡ０（９０　）、结合糖类的即ＧＨｂ为ＨｂＡ１（５　～　７　）。ＨｂＡ１又可以分为ＨｂＡｌａｌ、ＨｂＡ１ａ２、ＨｂＡｌｂ和　ＨｂＡｌｃ。临床上所测定的糖化血红蛋白主要指ＨｂＡｌｃ。　ＨｂＡｌｃ是ＧＨｂ的一种亚型，约占总ＧＨｂ的６Ｏ　～７Ｏ　，其分　子结构稳定，是ＧＨｂ分子中最有特征性的成分。它的Ｂ链Ｎ　末端有１个或２个缬氨酸可与组织中葡萄糖的游离醛基进行　不可逆的非酶促反应，即糖基化。ＨｂＡ１ｃ可以反映过去６～８　周的血糖水平，它的浓度既不受每天血糖波动的影响，也不受　运动和食物的影响，其血中含量的高低主要取决于血糖浓度及　血糖与Ｈｂ接触的时间，因此它是监测长期血糖水平的理想指　标　ｊ。　２检测方法　２．１离子交换层析法　其检测原理是基于ＧＨｂ和非ＧＨｂ　所带电荷不同进行分离。在偏酸性的阳离子交换树脂中，　ＨｂＡ和ＨｂＡ１均具有阳离子的特性，但由于ＨｂＡｌ的２个８　链Ｎ末端正电荷被糖基清除，所带正电荷较ＨｂＡ少，因此两　者对树脂的附着力不同，用低浓度洗脱液可首先将ＨｂＡ１洗　脱下来，而后用高浓度洗脱液洗脱出ＨｂＡ，得到相应的Ｈｂ层　析谱，可计算出ＨｂＡｌｃ所占百分率。　常见的离子交换层析法主要包括高效液相色谱法　（ＨＰＩ　ｃ）、低效液相色谱法（ＬＰＩ　ｃ）和手工微柱法。３种方法　中，ＨＰＬＣ测定结果更精确、准确性及重复性最好，美国临床化　学协会（ＡＡＣＣ）ＧＨｂ标准化分会和国际临床化学联合会（ＩＦ—　ＣＣ）ＨｂＡ１Ｃ标准化工作组建议，以ＨＰＬＣ方法作为检测ＧＨｂ　的金标准＿ｌ　，国内已有厂商推出此类产品，但此方法最大的缺　点是实验所用仪器及试剂、耗材昂贵，难以在基层医院推广普　及；Ｉ　ＰＩ　Ｃ原理与ＨＰＩ　Ｃ相同，研究证实，两法测定ＨｂＡｌｃ相　关性较好，其成本较ＨＰＬＣ低廉，操作简便，可随时插入急诊　样本，适合于中小型实验室使用ｌ＿】　。手工微柱法操作步骤繁　琐，易受以下因素影响：（１）层析时间和微柱质量不易控制，易　出现洗脱不全或过度洗脱；（２）外界环境温度对结果影响大；　（３）ＨｂＦ和变异血红蛋白（ＨｂＳ、ＨｂＣ、ＨｂＥ）易引起结果偏差，　因此现在已较少用于临床实验室中。　２．２　电泳法（以琼脂凝胶电泳为例）　其检测原理是利用酸性　缓冲液（ｐＨ　６．０）中，ＧＨｂ和非ＧＨｂ各组分等电点及泳动速度　不同进行分离检测。电泳完成后，距离负极端最近的是含糖基　最少的ＨｂＡ１ａ和ＨｂＡ１ｂ，处于中间部分的是ＨｂＡ１ｃ，距离正　极端最近的是Ｈｂ的主要成分ＨｂＡＯ，通过光密度仪扫描计　算，最终得出ＨｂＡｌｃ的百分含量。该方法样本用量少，分辨率　高，重复性较好，缺点是每次测定需成批进行样本分析，速度较　慢，无法插入急诊样本，自动化程度差，目前尚无商品化、具有　批量样本通过能力的仪器面世，因此该法现已少用于ｌ临床ｌｌ　。　２．３等电点聚焦法原理同电泳法。在聚丙烯肽凝胶薄板中　加入载体两性介质（如ａｍｐｈｏｌｉｎ），形成从阳极到阴极递增的　ｐＨ梯度，当样本通过薄板时，全血中各组分移动到各自等电　点的ｐＨ位置上，与电泳法相比，该法得到的色带更为精细和　集中，通过高分辨率微量光密度仪扫描，可以精确地测出各组　分的含量。因为血液中各类Ｈｂ一级结构及等电点不同，理论　上该法可以完全避免交叉干扰，是一种理想的检测方法，但实　验设备非常昂贵，无法用于常规检验。　２．４　亲和层析法　硼酸可与结合在Ｈｂ分子上葡萄糖的顺位　二醇基反应，形成可逆的五环化合物，使样本中的ＧＨｂ选择性　地结合于微柱上，而未糖化的Ｈｂ则被洗脱，之后用山梨醇解　离五环化合物，并洗脱ＧＨｂ，在４１５　Ｂｍ波长分别测定洗脱液　的吸光度，计‘算出ＧＨｂ的百分含量。临床实验室中最常用的　凝胶柱是交联间氨基苯硼酸的琼脂糖珠ｌ１　。　亲和层析法的优点是不受异常Ｈｂ的干扰，对经翻译后修　饰的Ｈｂ和病理Ｈｂ相对不敏感，对全血样本储存时间的要求　也不像离子交换层析法那样严格。但由于血液中所有糖类均　可与Ｈｂ结合，因此检测结果实际是ＧＨｂ总量，而不是　ＨｂＡ１ｃ。不过大量实验证明，该法所测结果与ＨＰＬＣ等方法　所测ＨｂＡ１Ｃ百分含量、平均血糖值均呈高度相关，表明其在病　情监测中仍是一种较理想的方法　。　２．５免疫法　２．５．１　离子捕获法其原理是ＧＨｂ与相应抗体结合后，联结　荧光标记物，形成反应复合物，再联结带负电荷的多聚阴离子　复合物，然后吸附到带正电荷的纤维表面，经过一系列清洗后　国际检验医学杂志２０１２年４月第３３卷第８期Ｉｎｔ　Ｊ　ＬａｂＭｅｄ，Ａｐｒｉｌ　２０１２，Ｖｏ１．３３，Ｎｏ．８　・　９５５　・　测定其荧光强度，从而得到ＧＨｂ的浓度。该法灵敏度和特异　性高，重复性好，自动化程度高，回收率可达９８．８５　，交叉污　染率低于０．０１　，适用于成批ＧＨｂ样本的检测［１５－１６］。　２．５．２　胶乳凝集法　是利用抗原抗体发生的凝集反应直接测　定总Ｈｂ中ＨｂＡｌｃ百分含量的方法。该法快速、准确、特异性　强、重复性好，最大的优点是可以在全自动生化仪上测定，不用　考方法的不断引入推动了ＨｂＡｌｃ检测标准化的进程　，近　期ＩＦＣＣ也推荐了一些新的参考物质。在这些方面，国内ＧＨｂ　研究与国外相比落后不少，这也使得ＧＨｂ检测的推广普及受　到极大限制。对于准备开展ＧＨｂ检测的临床实验室，如果仅　从方法的精密度、准确性与重复性上评价，ＨＰＬＣ无疑是最理　想的方法，但由于其成本昂贵，仅仅适合三甲以上的大型医院　使用；其他各种方法均有其优缺点，但检测结果也可基本满足　临床需求，适合于中小型医院开展。各临床实验室应根据自身　实际情况，选择适用于本实验室的最优方案，在降低成本的同　时，又可保证为临床提供准确、可靠的实验数据。　参考文献　另外购置专门的仪器，较好地节约了实验室成本，适合于成批　的样本检测，不足之处在于易受高浓度葡萄糖　胆红素、三酰甘　油等物质干扰。　２．５．３免疫比浊法　在样本中加入特制的抗ＨｂＡｌｃ抗体缓　冲液，使ＨｂＡ１ｃ与抗ＨｂＡｌｃ抗体结合形成可溶性的抗原抗体　复合物，再加人多聚半抗原缓冲液，与反应液中多余的抗　ＨｂＡｌｃ抗体反应，形成不溶性的抗原抗体复合物，用比浊法测　定ＨｂＡｌｃ含量，同时在另一通道中测定Ｈｂ，计算求得ＨｂＡ１ｃ　百分含量。免疫比浊法操作简便，检测周期短，成本低廉，准确　性高，重复性较好，实验证实，该法回收率可达９７．９　，ＣＶ＜　２　＿１　。其缺点是：（１）抗交叉污染能力差，易受脂浊、黄疸样　本影响；（２）该法线性范围小，一旦样本浓度超过标准品最高　值，就需稀释样本重检；（３）受ＨｂＦ及异常Ｈｂ影响大，结果不　稳定［１　。因此，国外有学者建议此法只能作为判断糖尿病患　者血糖水平的指标，而不能用于变异Ｈｂ的研究　］。　２．５．４化学发光法　采用离子捕捉免疫分析法，应用抗原抗　体反应原理，联结荧光标记物，通过连接带负电的多阴离子复　合物，吸附到带正电的纤维表面，经过一系列彻底清洗等步骤　后，测定荧光强度变化，计算ＨｂＡｌｃ浓度　。该法检测系统　易于规范和重复，可减少操作技术误差，检测的灵敏度和特异　度高，批内、批间变异系数小，回收率和准确度高，交叉污染率　小，影响因素少，但由于需采购专用试剂包和免疫发光分析仪，　成本昂贵，因此仅适用于大批量样本检查。　２．５．５放射免疫法放射免疫法测定ＧＨｂ不受各种干扰因　素的影响，特异性强、精密度高、成本较低、可批量测试，但由于　高效价抗体制备困难，目前未能有商品化试剂盒面世。　２．５．６金标免疫渗滤法该法操作简便，但特异度和精密度　相对较差，适用于床旁检测，能为临床医师提供快速的化验数　据参考ｌ２　。　２．６酶法第一反应中，全血经溶血处理后，在特异蛋白酶的　作用下，切断源于ＨｂＡ１ｃ的Ｊ３链Ｎ末端的糖化甘氨酰谷氨酰　胺，另一边通过测定６００　ｎｍ与８００　ｎｍ处的吸光度差，求出　Ｈｂ浓度；第二反应中，糖化甘氨酰谷氨酰胺在果糖基氨基酸　氧化酶和过氧化氢酶的先后作用下，与相应的显色剂耦联显　色，通过测定吸光度可求得ＨｂＡｌｃ浓度。　此技术的应用对ＧＨｂ的测定是个突破，表现在３个方面：　（１）特异蛋白内切酶特异酶解血液中的Ｈｂ产生果糖基氨基　酸，血浆中的其他蛋白，如清蛋白、球蛋白等对结果不能产生干　扰；（２）果糖基氨基酸氧化酶，只在特定的蛋白酶体系与果糖氨　基酸反应；（３）在溶血液体系中应用了Ｈ。Ｏ２测定的敏感度，由　于过氧化氢酶可以分解色素原引起负反应，所以用过氧化物酶　代替，此法提供了一个像临床生化反应一样快速均一的反应系　统，有很高的精密度，可同时检测ＧＨｂ和Ｈｂ，且与常规ＨＰＬＣ　法和免疫测定法有很好的相关性，不需要昂贵、专用的仪　器［２　。有实验报道，该法批内ＣＶ＜１．５０　，批间ＣＶ＜　２．５Ｏ　，平均回收率可达１０１．３７　。　３结　语　近几年，随着新技术、新方法的不断应用，一些新的校准参　［１］Ｙａｎｇ　Ｗ，Ｌｕ　Ｊ，Ｗｅｎｇ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ　ｏｆ　ｄｉａｂｅｔｅｓ　ａｍｏｎｇ　ｍｅｎ　ａｎｄ　ｗｏｍｅｎ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｎ　Ｅｎｇｌ　Ｊ　Ｍｅｄ，２０１０，３６２（１２）：１０９０—　１１０１．　Ｅ２］Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．Ｓｔａｎｄａｒｄｓ　ｏｆ　ｍｅｄｉｃａｌ　ｃａｒｅ　ｉｎ　ｄｉａ—　ｂｅｔｅｓ　２ＯｌＯ［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ｃａｒｅ，２０１０，３３（Ｓｕｐｐｌ　１）：１１—６１．　［３］邓兆享，彭杰雄，钟惠霞．糖化血红蛋白、空腹血糖和５０　ｇ糖筛查　对妊娠期糖尿病诊治的临床意义［Ｊ］．国际检验医学杂志，２０１０，　３１（２）：１５３－１５５．　［４３赖基贤，江文庆，赖胜华，等．糖化血红蛋白在糖尿病诊断中的临　床意义［Ｊ］．临床医学，２０１１，３１（２）：５３—５４．　［５３喻芳菊．三种糖尿病评估方法分析［Ｊ］．实验与检验医学，２００８，２６　（５）：５７５－５７６．　ｒ６］Ｇｏｏｄａｌｌ　Ｉ，Ｃｏｌｍａｎ　ＰＧ，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ　ＨＧ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｓｉｒａｂｌｅ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｓｔａｎｄａｒｄｓ　ｆｏｒ　ＨｂＡ（１ｃ）ａｎａｌｙｓｉｓ—ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ，ａｃｃｕｒａｃｙ　ａｎｄ　ｓｔａｎｄａｒｄ—　ｉｚａｔｉｏ：ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ　ｓｔａｔｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｕｓｔｒａｌａｓｉａｎ　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｓ（ＡＡＣＢ），ｔｈｅ　Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ　Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ｓｏｃｉｅｔｙ　（ＡＤＳ），ｔｈｅ　Ｒｏｙａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｕｓｔｒａｌａｓｉａ（ＲＣＰＡ），Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ　Ｓｏｃｉ　ｅｔｙ　ｏｆ　Ａｕｓｔｒｌｉａ（ＥＳＡ）ａｎｄ　ｔｈｅ　Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ　Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ｅｄｕｃａｔｏｒ　Ａｓｓｏ—　ｃｉａｔｉｏｎ（ＡＤＥＡ）［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｅｍ　Ｉ　ａｂ　Ｍｅｄ，２００７，４５（８）：１０８３—１０９７．　［７３叶应妩，王毓三，申子瑜．全国临床检验操作规程［Ｍ］．３版．南京：　东南大学出版社，２００６：３４７．　［８］Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｋｉｎｇ—　ｄｏｍ　ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ　ｄｉａｂｅｔｅｓ　ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ｃａｒｅ，２０００，２３（Ｓｕｐｐｌ　１）：２７－３１．　Ｅ９］Ｋｉｎｇ　Ｈ，Ａｕｂｅｒｔ　ＲＥ，Ｈｅｒｍａｎ　ＷＨ．Ｇｌｏｂａｌ　ｂｕｒｄｅｎ　ｏｆ　ｄｉａｂｅｔｅｓ，　１９９５—２０２５：ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ，ｎｕｍｅｒｉｃａｌ　ｅｓｔｉｍａｔｅｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．　Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ｃａｒｅ，ｌ９９８，２１（９）：ｌ４１４－１４３１．　［１Ｏ］杨利黎，孙静．两种糖化血红蛋白分析仪的临床应用［Ｊ］．检验医　学与临床，２００８，５（９）：５４５—５４６．　［１１］冯雪凤，贾支俊，黄群，等．离子交换ＨＰＬＣ和ＬＰＬＣ测定ＨｂＡ１ｃ　的比较［Ｊ］．医学临床研究，２００７，２４（１２）：２１０５—２１０６．　［１２］吴宇芳，关晓东．琼脂糖凝胶电泳法测定糖化血红蛋白及其临床　应用［Ｊ］．西部医学，２００３，１（２）：１０１—１０２．　［１３］黄颖，樊希承．糖化血红蛋白几种常见检测方法Ｉ－ｊ］．１临床与实验　医学杂志，２００９，８（２）：１２６—１２７．　［１４］李顺君，黄文芳，饶绍琴，等．糖化血红蛋白测定方法学评价口］．　检验医学与临床，２００７，４（５）：３８１．　［１５］胡进访，吴雁．糖化血红蛋白检测方法学的研究进展［Ｊ］．医学综　述，２０１０，１６（１３）：２０４７—２０５０：　［１６］张阳．糖化血红蛋白的检测方法及临床应用［Ｊ］．现代医药卫生，　２００７，２３（５）：２２８６—２２８７．　［１７］胡应秀，张红梅．免疫透射比浊法测定ＨｂＡｌｃ的可靠性研究［Ｊ］．　吉林医学，２０１１，３２（２４）：４９６９—４９７０．　＿１８］索艳，李强．糖化血红蛋白测定方法及影响因素的研究进展［Ｊ］．　医学研究生学报，２０１０，２３（２）：２１０—２１３．　・９５６・　国际检验医学杂志２０１２年４月第３３卷第８期Ｉｎｔ　Ｊ　ＬａｂＭｅｄ，Ａｐｒｉｌ　２０１２，Ｖｏ１．３３，Ｎｏ．８　ｒ１９］Ｒｏｂｅｒｔｓ　ＷＬ，Ｓａｆａｒ－Ｐｏｕｒ　Ｓ，Ｄｅ　ＢＫ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ　Ｃ　ａｎｄ　Ｓ　ｔｒａｉｔｓ　ｏｎ　ｇｌｙｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ　ｂｙ　ｅｌｖｅｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　［２５］Ｐａｎｔｅｇｈｉｎｉ　Ｍ，Ｊｏｈｎ　ＷＧ．Ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈａｅｍｏｇｌｏｂｉｎ　Ａｌｃ　ｒｅ—　ｓｕｉｔｓ　ｔｒａｃｅａｂｌｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　ＩＦＣＣ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｙｓｔｅｍ：ｔｈｅ　ｗａｙ　ｆｏｒｗａｒｄ［Ｊ］．　Ｃｌｉｎ　Ｃ　ｈｅｍ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，２００７，４５（８）：９４２—９４４．　ｒｊ］．ＣｌｉｎＣｈｅｍ，２００５，５１（４）：７７６—７７８．　ｒ２０３　Ｂｒｙ　Ｌ，Ｃｈｅｎ　ＰＣ，Ｓａｃｋｓ　ＤＢ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ　ｖａｒｉａｎｔｓ　ａｎｄ　ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ　ｏｎ　ａｓｓａｙｓ　ｆｏｒ　ｇｌｙｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ［Ｊ］．　Ｃｌｉｎ　Ｃｈｅｍ，２００ｌ，４７（２）：１５３－１６３．　［２６］Ｈｏｅｌｚｅｌ　Ｗ，Ｗｅｙｋａｍｐ　Ｃ，Ｊｅｐｐｓｓｏｎ　ＪＯ，ｅｔ　ａ１．ＩＦＣＣ　ｒｅｆｅｒｎｃｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｆｏｒ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ　Ａ１　ｅ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｂｌｏｏｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎａ—　ｔｉｏｎａ１　ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ　ｓｃｈｅｍｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｓｔａｔｅｓ，Ｊａｐａｎ，ａｎｄ　［２１］梁劲松，李生．化学发光法检测糖化血红蛋白的实验评价［Ｊ］．江　西医学检验，２００３，２１（６）：５０３．　Ｓｗｅｄｅｎ：ａ　ｍｅｔｈｏｄ—ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｅｍ，２００４，５０（１）：　１６６—１７４．　［２２］贺岩，罗梅．金标法测定糖化血红蛋白的方法学比较口］．中国医　疗前沿，２００７，２（１３）：１０１—１０２．　［２７］Ｗｅｙｋａｍｐ　Ｃ，Ｊｏｈｎ　ＷＧ，Ｍｏｓｃａ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ＩＦＣＣ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｍｅａｓ　ｕｒｅｍｅｎｔ　ｓｙｓｔｅｍ　ｆｏｒ　ＨｂＡ１ｅ：ａ　６－ｙｅａｒｓ　ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｒｅｐｏｒｔ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｅｍ。２００８．５４（２）：２４０—２４８．　［２３］王冬环，张传宝，陈文祥，等．应重视糖化血红蛋白测定技术及量　值溯源［Ｊ］．中华检验医学杂志，２００８，３（９）：９６５—９６８．　［２４］肖弘，王敏，李小盛．酶化学法测定糖化血红蛋白性能的验证［Ｊ］．　检验医学与临床，２０１ｌ，８（１２）：１４５０—１４５４．　・（收稿日期：２０１１－１２－２５）　综　述・　嗜麦芽窄食单胞菌的耐药机制研究进展　吴春燕　综述，赵擎宇　审校　（中山大学：１．中山医学院；２．肿瘤防治中心，广州５１００６０）　关键词：嗜麦芽窄食单胞菌；　耐药机制；　医院感染　ＤＯ１：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３０．２０１２．０８．０３０　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７３—４１３０（２０１２）０８—０９５６—０３　嗜麦芽窄食单胞菌（Ｓｍ）广泛存在于自然界，存在于各类　液体、塑料物质表面和患者的体表，也是医院中常见的条件致　２嗜麦芽窄食单胞菌的耐药机制　２．１膜屏障Ｓｍ具有天然的低渗透性外膜，对很多抗生素有　天然耐药性。生物膜使Ｓｍ拥有动力特征，经过２　ｈ的体外孵　育，菌落能快速黏附聚苯乙烯。有研究指出，Ｓｍ的膜孔蛋白直　径与大肠杆菌的一样，但由于膜孔蛋白拷贝数少，其通透性只　有大肠杆菌的３　～５　；加上受到抗生素的刺激后，菌体还可　以通过改变膜孔蛋白的结构或者减少打开的数量使通透性进　一病菌，在侵入操作和患者免疫力下降后极易引起下呼吸道感　染、心内膜炎、脑膜炎、皮肤组织感染、尿道感染等，随着抗生素　的广泛应用，Ｓｍ成为具有易感因素患者院内感染的重要致病　菌之一［１　］。Ｓｍ的耐药机制极为复杂，针对Ｓｍ感染的复杂　性，检验工作者应予足够的重视。　１　Ｓｍ的生物学性状　步降低，产生获得性耐药　。　生物膜的调节机制具有多样性。氨基糖苷类抗生素温度　在自然界中Ｓｍ生长在土壤、水、植物和动物身上，１９５８年　首先从口腔肿瘤患者咽拭子中分离发现，被命名为嗜麦芽假单　胞菌，１９８１年曾被划归属于黄单胞属；但１９９３年有学者将其　从黄单胞属划为另一新菌属，被命名为嗜麦芽窄食单胞菌　。］。　Ｓｍ是专性需氧的革兰阴性杆菌，无芽孢，有丛鞭毛，血平板培　依赖的耐药性与外膜上面脂多糖的０侧链改变或者脂多糖的　磷酸含量降低有关；而外膜上的微孑Ｌ蛋白常有丢失或基因突变　造成的缺失与对碳青霉烯类的天然耐药有关＿６］。金属阳离子　Ｃａ　和Ｍｇ　等对细胞膜有稳定作用而增强其耐药性，而金属　螯合剂ＥＤＴＡ或者枸橼酸盐等能破坏细菌外膜中的金属阳离　子从而扭转耐药性。　２．２抑制抗生素活性的各种酶类　养物有很强的氨味，呈Ｂ溶血；在琼脂平板上，菌落呈针尖状，　无色或灰黄色，中央凸起。该菌能产生硝酸盐还原酶、赖氨酸　脱羧酶和降解脂肪的酶类。Ｓｍ营养谱有限，对葡萄糖只能缓　慢利用，但能快速分解麦芽糖而产酸。以１６Ｓ　ｒＲＮＡ测序可以　将从自然界和临床分离获得的Ｓｍ分为３个种群，包括以　２．２．１　７－内酰胺酶Ｓｍ对　内酰胺类药物的耐药机制主要　是表达　内酰胺酶，Ｓｍ至少产生２种ｐ一内酰胺酶，即ｕ和Ｌ２　型金属Ｂ一内酰胺酶（简称Ｌ１和Ｌ２）。Ｌ１是四聚体，相对分子　质量是１１８Ｘ１０　，具有２个Ｚｎ　活性位点，能水解青霉素类、　头孢菌素、８一内酰胺酶抑制剂和大多数碳青霉烯类；Ｌ２是二聚　体，相对分子分量是５７×１Ｏ　，具有丝氨酸的活性位点，主要水　Ｋ２７９ａ为代表的Ａ群，以Ｎ５３１为代表的Ｂ群，以６７５ａ为代表　的Ｃ群　］。临床分离株主要是具有高度同源性的Ａ群和具有　更多异质性的Ｂ群。　Ｓｍ的毒性不强，有一些菌株甚至被应用于生物技术，如　生物去污、生物降解以及生物防治［５］。而该菌致病性与其产生　的酶类和黏附能力有关　］。酶类（包括蛋白酶、脂肪酶、弹性蛋　解头孢菌素和单环类抗生素＿７］。８一内酰胺酶属于染色体酶，其　中Ｌｌ有５个基因型，Ｌ２有４个基因型，另外有研究者发现了　携带编码Ｌ２基因的质粒ｌ８］。ｐ一内酰胺酶基础表达量低的菌群　对ｐ一内酰胺类抗生素的敏感性是最高的，而ｐ一内酰胺类抗生素　的选择压力能使Ｌ１和Ｌ２基因快速进化［７＿８＿。　Ｇ一内酰胺酶调控因子ＡｍｐＲ的激活对于Ｌ１、Ｌ２的诱导和　白酶等）能引起局部组织损伤以及出血；菌毛使菌体具有强大　的黏附能力，能黏附在塑料物质表面以及上皮细胞，增加感染　的概率；菌体的生物膜能抵抗吞噬作用和耐受抗生素。这些致　病作用与可扩散的信号因子（ＤＳＦ）有关。　＊　基金项目：中山大学医教科研基金资助项目（医教２０１Ｉ－４１号）。