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一抗的用量要根据你的抗体的质量来看的,在抗体的说明书上一般都有推荐的浓度,刚开始可以做个中间的浓度摸下条件。在短期内一抗可以反复使用的,所以放在杂交袋中方便回收使用。一抗用TBST+5%脱脂奶粉配制的溶液来稀释,每次实验用多少的要看你的膜的大小,放在杂交袋中能够覆盖你的膜为准。